摘要:目的:建立感冒疏风颗粒微生物限度检查方法。方法:按《中国药典》2010版的要求[1],通过接种代表性的阳性菌株,用常规法、稀释法及薄膜过滤法对五株阳性菌株进行回收率测定。结果:该样品没有抑菌性,常规法、稀释法及薄膜过滤法对五株阳性菌株回收率均高于70%。结论:本样品细菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌大肠埃希菌均可采用常规法进行检查。
关键词:感冒疏风颗粒;微生物限度检查;回收率;方法学验证
中图分类号:R284.2文献标志码:A
文章编号:1007-2349(2013)08-0059-02
感冒疏风颗粒具有辛温解表,宣肺和中的功能[2]。临床用于治疗风寒感冒,发热咳嗽,头痛怕冷,鼻流清涕,骨节酸痛,四肢疲倦。当建立产品的微生物限度检查法时,应进行细菌、霉菌及酵母菌数计数方法的验证,以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定[1]。本文通过接种代表性的五株阳性菌株,采用常规法、稀释法及薄膜过滤法进行微生物限度检查方法学验证实验,为该样品建立了微生物限度检查方法。
1仪器与材料
1.1仪器HTY-2000A集菌仪(杭州高得医疗器械有限公司);开放式集菌器(北京牛牛基因技术有限公司,批号:20101005)。
1.2样品感冒疏风颗粒(云南雄业制药有限公司,规格/袋,批号20110101,20110102,20110103,20101001,20101105)。
1.3培养基和试剂改良马丁液体培养基(批号,1011042),改良马丁琼脂培养基(批号,010315),玫瑰红钠琼脂培养基(批号,110208),营养肉汤培养基(批号,110120),营养琼脂培养基(批号,101224),胆盐乳糖增培养基(批号,101226),北京三药科技开发公司。
1.4菌种大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(F)44102]、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]、黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98 003](中国药品生物制品检定所提供)
2方法
按中国药典2010版一部微生物限度检查法(附录XⅢ C)[1]进行实验。
2.1菌液制备取经34℃培养18~24 h,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌肉汤液体培养物1 mL,加入9 mL 0.9%氯化钠溶液中,10倍稀释至10-5~10-7备用;取经24℃培养18~24 h的白色念珠菌液体培养物1 mL,加入9 mL 0.9%氯化钠溶液中,10倍稀释至10-6备用;取经培养一周的黑曲霉菌斜面物,加0.9%氯化钠溶液3mL,洗下孢子,转移至另一空管,标准比浊后,取1 mL加入0.9%氯化钠溶液中10倍稀释至10-4备用。
2.2菌液的检验取上述金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠埃希菌10-5~10-7稀释液各1 mL,用45℃营养琼脂培养基20 mL注皿,各平行测定两皿,30~35℃培养48 h,计数,应约为50~100 cfu/mL;取上述白色念珠菌10-5~10-6稀释液及上述黑曲霉菌10-4孢子悬液各1 mL,用45℃玫瑰红钠琼脂培养基20 mL注皿,各平行测定两皿,23~28℃培养,逐日观察计数,应约为50~100 cfu/mL。结果见表1。
2.3供试液制备取样品10 mg,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 ml,用匀浆议混匀,作为1:10的供试液。
2.4回收率的测定
2.4.1细菌数霉菌数常规法测定试验组:取1:10供试液1 mL、50~100 cfu 试验菌同时加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72 h逐日观察结果。
菌液组:测定每一菌株所加的试验菌数(同菌液检验)。
供试品对照组:取1:10供试液1 mL加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72 h逐日观察结果,测定供试品本底菌数
2.4.2细菌数霉菌数稀释法测定试验组:取1:10供试液0.2 mL/皿、50~100 cfu试验菌同时加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养24~72 h逐日观察结果。
菌液组:测定每一菌株所加的试验菌数(同菌液检验)。
2.4.3细菌数霉菌数薄膜过滤法测定取1:10的供试液1 mL,注入开放式滤器(先用少量缓冲液润湿滤器),用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每次100 mL共4次(每次充分振摇滤器,总冲洗400 mL),留有少量缓冲液加1 mL(50~100 cfu)试验菌混匀,抽干后,取出滤膜菌面朝上贴入规定琼脂平板培养基中,置规定温度培养48 h,结果见表2。
2.5回收率的计算按如下公式计算试验组的加菌回收率:
试验组的加菌回收率=
试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数菌液组的平均菌落数×100%
2.6控制菌检查方法的验证
2.6.1常规法取1:10供试液10 mL加入100 mL胆盐乳糖培养基中,同时加入上述大肠埃希菌液1 mL,置35℃培养24 h;取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10 mL加入100 mL胆盐乳糖培养基,同时加入金黄色葡萄球菌液1 mL,置35℃培养24 h,作为阴性菌对照组。另取1:10供试液1 mL加入10 mL胆盐乳糖发酵培养基中,同时加入上述大肠埃希菌液1 mL,置35℃培养24 h;取1:10供试液1 mL加入10 mL胆盐乳糖发酵培养基中置35℃培养24 h,作为阴性对照。
3结果与讨论
3.1结果见表1、表2。
4结论
本样品通过接种5株阳性试验菌株进行方法学验证,通过进行3次平行实验,验证了其方法的有效性和可靠性,建立了感冒疏风颗粒微生物限度检查的方法:细菌数、霉菌数和酵母菌数、控制菌大肠埃希菌均可采用常规法法进行检查。
参考文献:
[1]国家药典委员会.中国药典2010年版[S].一部.北京:化学工业出版社,2010.
[2]国家中成药汇编.中成药地方标准上升国家标准部分[S].北京:人民卫生出版社,2001.
(收稿日期:2013-06-17)
文章為用戶上傳,僅供非商業瀏覽。發布者:Lomu,轉轉請註明出處: https://www.daogebangong.com/zh-Hant/articles/detail/pmq4sb0263v8.html
评论列表(196条)
测试